流式細胞術(shù)
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?????? 流式細胞術(shù)生物分析技術(shù)的突出特點是在單個細胞水平進行測定,可在同一細胞內(nèi)同時檢測兩種或更多種細胞因子,可根據(jù)細胞免疫表型區(qū)分不同的細胞亞群,進行多參數(shù)相關(guān)分析。
?????? 與傳統(tǒng)的熒光鏡檢相比,流式細胞術(shù)具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點,可以高速分析上萬個細胞,并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù),成為當(dāng)代先進的細胞定量分析技術(shù)。目前流式細胞術(shù)儀器和方法的日臻完善,它的應(yīng)用范圍也日益廣泛,現(xiàn)已普遍用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細胞生物學(xué)、細胞遺傳學(xué)和生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。
?????? 隨著單克隆抗體的發(fā)展,以及流式細胞儀檢測方法的不斷完善,采用流式細胞術(shù)不但可以對細胞表面的抗原和受體進行分析,對細胞內(nèi)的抗原或分子也可以進行檢測?,F(xiàn)在細胞微球試驗(CBA)技術(shù)的出現(xiàn),使得流式細胞儀可以檢測血清、血漿、培養(yǎng)液上清或其他體液中可溶性蛋白和細胞因子.
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Bio-Plex 生物分析技術(shù)
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????? Bio-Plex懸液芯片系統(tǒng)將先進的軟件包、系統(tǒng)檢驗工具、微球耦聯(lián)試劑和即用型細胞因子與磷酸化蛋白測試試劑整合在一起,使硬件、軟件和檢測試劑形成一個功能強大的芯片技術(shù)平臺,大大提高了結(jié)果的精確性和可重復(fù)性,使用更加簡便高效。該系統(tǒng)為蛋白與核酸研究人員提供了靈活的復(fù)合測試方案,可在單個樣品中同時分析多達100個生物分子。利用100種不同顏色微球(xMAP技術(shù))標(biāo)記生物分子配體,每個微球可耦聯(lián)一個對應(yīng)不同靶分子的特異反應(yīng)物。
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免疫生物分析技術(shù)
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?????? 細胞因子均為蛋白或多肽,具有較強的抗原性。隨著重組細胞因子的出現(xiàn),可較方便地獲得細胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體,因此可利用抗原抗體特異性反應(yīng)的特性,用免疫學(xué)技術(shù)定量檢測細胞因子,常用的方法包括ELISA、RIA及Western Blot 免疫印跡法。
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?????? 盡管細胞因子種類繁多,只要獲得了針對某一因子的特異性抗體(包括多克隆抗體或單克隆抗體)均可采用相似的技術(shù)開展工作。免疫學(xué)檢測法可直接測定樣品中特定細胞因子的含量(用ng/ml表示),為大規(guī)模檢測臨床病人血清中細胞因子的含量提供了方便。本法僅測定細胞因子的抗原性,與該因子活性不一定相平行,因此要了解細胞因子的生物學(xué)效應(yīng),必須結(jié)合生物學(xué)檢測法。
?????? 使用不同的生物分析技術(shù)進行細胞因子檢測,可能結(jié)果有些差異,且不同的檢測方法各有優(yōu)缺點,可以根據(jù)實驗?zāi)康暮蛯嶒炇覘l件進行選擇。在進行細胞因子檢測時,應(yīng)考慮到細胞因子的作用具有網(wǎng)絡(luò)性的特點,需明確檢測方法所測定的細胞因子成分,并考慮其抑制劑和可溶性受體的水平,將各種結(jié)合使用,有可能得到較為可靠的結(jié)果。
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